實(shí)驗(yàn)室危險(xiǎn)物質(zhì)及處理方法--EBEBEthidium bromide，溴化乙錠

時(shí)間：2015年12月22日信息來源：湘智離心機(jī) 字體：大中小【打印此頁】

溴化乙錠是一種高度靈活的熒光染色劑，用于察看瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA。溴化乙錠用規(guī)范302nm 紫外光透射儀激起并放射出橙紅色信號(hào)，察看瓊脂糖凝膠中DNA最常用的辦法是應(yīng)用熒光染料溴化乙錠停止染色，溴化乙錠含有一個(gè)能夠嵌入DNA堆積堿基之間的一個(gè)三環(huán)平面基團(tuán)。它與DNA的分離簡直沒有堿基序列特異性。在高離子強(qiáng)度的飽和溶液中，大約每2.5個(gè)堿基插入一個(gè)溴化乙錠分子。當(dāng)染料分子插入后，其平面基團(tuán)與螺旋的軸線垂直并經(jīng)過范德華力與上下堿基互相作用。這個(gè)基團(tuán)的固定位置及其與堿基的親密接近，招致與DNA分離的染料呈現(xiàn)熒光，其熒光產(chǎn)率比游離溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm處的紫外輻射并傳送給染料，而被分離的染料自身吸收302nm和366nm的光輻射。這兩種狀況下，被吸收的能量在可見光譜紅橙區(qū)的590nm處重新發(fā)射出來。由于溴化乙錠-DNA復(fù)合物的熒光產(chǎn)率比沒有分離DNA的染料高出20-30倍，所以當(dāng)凝膠中含有游離的溴化乙錠（0.5ug/ml）時(shí)，能夠檢測到少至10ng的NDA條帶。溴化乙錠能夠嵌入堿基分子中，招致錯(cuò)配。溴化乙錠是強(qiáng)誘變劑，具有高致癌性！會(huì)在60－70度是蒸發(fā)（所以最好不要在膠太熱的時(shí)分加，或者應(yīng)該加到液體里，0.5ug/ml，染色半小時(shí)）（當(dāng)EB加得過多時(shí)，也能夠在室溫用水將已染色的凝膠浸泡20min以降低未分離的EB惹起的背景熒光）。
溴化乙錠溶液的凈化處置：由于溴化乙錠具有一定的毒性，實(shí)驗(yàn)完畢后，應(yīng)對(duì)含EB的溶液停止凈化處置再行棄置，以防止污染環(huán)境和危害人體安康。

（1）關(guān)于EB含量大于0.5mg/ml的溶液，可如下處置：
①將EB溶液用水稀釋至濃度低于0.5mg/ml；
②參加一倍體積的0.5mol/L KMnO4，混勻，再參加等量的25mol/L HCl，混勻，置室溫?cái)?shù)小時(shí)；
③參加一倍體積的2.5mol/L NaOH，混勻并廢棄。

（2）EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下處置：
① 按1mg/ml的量參加活性炭，不時(shí)輕搖混勻，室溫放置1小時(shí)；
② 用濾紙過濾并將活性碳與濾紙密封后丟棄

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