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雄鼠細(xì)胞膜分離操作步驟

時(shí)間：2015年12月22日信息來(lái)源：湘智離心機(jī) 字體：大中小【打印此頁(yè)】

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備： 樣品：雄鼠空腹12h 試劑：生理鹽水 0.25mol/L 蔗糖溶液（含0.3mol/LCacl2） 0.34mol/L 蔗糖溶液（含0.3mol/LCacl2） 儀器：常規(guī)的分離細(xì)胞膜的離心機(jī)。
實(shí)驗(yàn)步驟：

取空腹12h雄鼠 1、取空腹12h雄鼠處死，放血。解剖取肝臟，迅速用生理鹽水洗凈，用濾紙吸干。取3g肝臟剪碎，經(jīng)冷的0.25mol/L 蔗糖溶液洗滌數(shù)次，加18ml預(yù)冷0.25mol/L 蔗糖溶液勻漿，用雙層尼龍膜過(guò)濾，備用。

放入離心管

2、將勻漿的放入離心管中，沿壁小心加入等體積的0.34mol/L 蔗糖溶液覆蓋于樣品上，以700g離心10分鐘

離心機(jī)上進(jìn)行分離

3、將離心沉淀以0.25mol/L 蔗糖溶液洗滌， 1000g（3500r/min）離心10min，重復(fù)一次。

用于實(shí)驗(yàn)的離心機(jī)

4、離心后沉淀為細(xì)胞核，其上有一較疏松的上層，小心吸出此上層，懸于密度d20為1.16的蔗糖溶液（51g/L)中，移入離心管，沿壁加密度d20為1.18的蔗糖溶液（51.5g），覆蓋在樣品層上層。700g（3000r/min）離心10min，細(xì)胞膜組分位于兩層溶液界面，小心吸出，置低溫保存，以備進(jìn)一步分析。

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